Práctica 1. Construcción de una curva de calibración y manejo del espectrofotómetro 19/09/2019

OBJETIVOS

  • En esta práctica utilizamos dos colorantes como analitos con capacidad cromógena para elaborar sendas baterías de dilución seriadas, que utilizaremos posteriormente para elaborar sus correspondientes curvas de calibración. 
  • El objetivo de esta práctica es construir las curvas de calibración con la ayuda del espectrofotómetro. Esta primera práctica es muy útil para aprender como manejar este aparato. Finalmente, calculamos la concentración de diversas disoluciones problema.
    Espectrofotómetro

UTILIDAD CLÍNICA

  • La utilidad clínica de esta práctica es aprender el manejo el espectrofotómetro, ya que el tipo de espectrofotometría utilizada en esta práctica es usado para medir la concentración de un analito en una muestra basándose en la capacidad de dicho analito para absorber luz de una determinada longitud de onda al ser excitado por una radiación electromagnética.

FUNDAMENTOS

  •  Cuando un haz de luz incide sobre una muestra problema, esta absorbe radiación de una determinada longitud de onda. El resto de las radiaciones serían transmitidas y aparecerá a la vista un color que no es sino la suma de las longitudes de onda que no han sido absorbidas.
  • Con la ayuda del espectrofotómetro podemos calcular la relación existente entre la intensidad de la luz resultante o transmitida y la de la luz incidente. Esta tramitancia se expresa como porcentaje, pero el espectrofotómetro nos muestra la absorbancia, que se obtiene realizando un cálculo matemático.
  • Utilizando las concentraciones y las absorbancias de las muestras analizadas, podemos elaborar las curvas de calibración.

APARATOS

Espectrofotómetro, es muy importante encenderlo unos 15 minutos antes de comenzar a utilizarlo

Fotómetro
Este aparato lo utilizamos para saber a que longitud de onda que corresponde a cada cromógeno debemos elegir para medir la absorbancia de cada tubo

MATERIALES

Gradilla con tubos de ensayo

Pipeta graduada de 5 ml

Auxiliar de pipeteado

Soporte para cubetas y cubetas de espectrofotometría de vol: 1 cm

REACTIVOS

Erlenmeyer con cromógeno 1, de concentración 800 mg/dL
Erlenmeyer con cromógeno 2, de concentración 600 mg/dL

Agua destilada para realizar las diluciones

CÁLCULOS


PROCEDIMIENTO

  • BATERÍA 1. Consta de 5 tubos con 4 mL cada uno y un factor de dilución 1/2. Ya hemos realizado los cálculos y sabemos que el volumen de paso es de 4 mL.

  1. Preparamos los 5 tubos que utilizamos y los rotulamos.
  2. Pipeteamos 8 mL del cromógeno 1 (800 mg/dL) al primer tubo y 4 mL de agua destilada al resto de tubos (2, 3, 4 y 5).
  3. Pipeteamos 4 mL del primer tubo al tubo 2 y homogeneizamos.
  4. Pipeteamos 4 mL del tubo 2 al tubo 3 y homogeneizamos.
  5. Pipeteamos 4 mL del tubo 3 al tubo 4 y homogeneizamos.
  6. Pipeteamos 4 mL del tubo 4 al tubo 5 y homogeneizamos. Desechamos 4 mL del tubo número 5.
  7. Elegimos la longitud de onda correspondiente al cromógeno 1, que es 670 nm.
    Primera cubeta (tubo 1)
  8. Medimos la absorbancia de cada uno de los tubos utilizando las cubetas de espectrofotometría.
  9. Con los datos obtenidos, elaboramos la curva de calibración.

  • BATERÍA 2. Consta de 4 tubos con 3 mL cada uno y un factor de dilución 1/3. Ya hemos realizado los cálculos y sabemos que el volumen de paso es de 1,5 mL.

  1. Preparamos los 4 tubos que utilizamos y los rotulamos.
  2. Pipeteamos 4,5 mL del cromógeno 2 (600 mg/dL) al primer tubo y 3 mL de agua destilada al resto de tubos (2, 3 y 4).
  3. Pipeteamos 1,5 mL del primer tubo al tubo 2 y homogeneizamos.
  4. Pipeteamos 1,5 mL del tubo 2 al tubo 3 y homogeneizamos.
  5. Pipeteamos 1,5 mL del tubo 3 al tubo 4 y homogeneizamos. Desechamos 1,5 mL del tubo número 4.
  6. Elegimos la longitud de onda correspondiente al cromógeno 2, que es 499 nm.
  7. Medimos la absorbancia de cada uno de los tubos utilizando las cubetas de espectrofotometría.
  8. Con los datos obtenidos, elaboramos la curva de calibración.

DISOLUCIONES PROBLEMA 26/09/2019

  • DISOLUCIÓN PROBLEMA 1. Tenemos una disolución problema y queremos saber su concentración.

  1. Elegimos la longitud de onda correspondiente al cromógeno (662 nm), y medimos en el espectrofotómetro utilizando las cubetas.
  2. Una vez obtenida su absorbancia, utilizamos la curva de calibración anterior y podemos averiguar su concentración.

  • DISOLUCIÓN PROBLEMA 2. Tenemos una disolución problema y queremos saber su concentración.

  1. Elegimos la longitud de onda correspondiente al cromógeno (499 nm), y medimos en el espectrofotómetro utilizando las cubetas.
  2. Una vez obtenida su absorbancia, utilizamos la curva de calibración anterior y podemos averiguar su concentración.

RESULTADOS

  • Estas son las curvas de calibración obtenidas, con las disoluciones problema representadas en ellas:
  • Los resultados obtenidos son normales. Estos datos pueden variar entre los alumnos, pero puede deberse a:
    • Errores al realizar las diluciones.
    • Hemos utilizado dos aparatos distintos: espectrofotómetro y fotómetro.




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