Práctica 3. Cuantificación de proteínas en orina con ácido sulfosalicílico por turbidimetría 14/10/2019

OBJETIVOS

• El objetivo de esta práctica es aplicar la técnica de turbidimetría aprendida en clase.
  

UTILIDAD CLÍNICA

• La utilidad clínica de esta práctica es determinar la concentración de proteínas de la muestra de orina problema.

FUNDAMENTOS

• La adición de ácido sulfosalicílico a una solución de proteínas actúa sobre estas, dando lugar a la aparición de un fino precipitado en suspensión. Este precipitado se observa como una turbidez blanquecina cuya intensidad puede ser cuantificada por turbidimetría.
• Basándonos en este método turbidimetrico vamos a cuantificar la concentración de proteínas presentes en una muestra de orina.

APARATOS

Espectrofotómetro, es muy importante encenderlo unos 15 minutos antes de comenzar a utilizarlo

Balanza

MATERIALES

Gradilla con tubos de ensayo

Pipeta automática y puntas desechables

Soporte para cubetas y cubetas de espectrofotometría de vol: 1 cm

REACTIVOS

• Suero salino fisiológico.
• Patrón de proteínas (7g/dL)
• Albúmina bovina.

CÁLCULOS

• Queremos preparar 100 mL de ácido sulfosalicílico al 3% (p/v) en agua destilada, así que necesitamos pesar 3 gramos de ácido.
  

PROCEDIMIENTO

• Ácido sulfosalicílico al 3% (p/v)

1. Preparamos el ácido que necesitamos y lo almacenamos en un bote etiquetado.
   

• Técnica

1. Rotulamos un tubo como BR o blanco de reactivo, otro como BM o blanco de muestra, y cuatro más como P1, P2, P3 Y P4 (patrones), y un último como PB o problema.
   
2. Preparamos las siguientes diluciones:
1. D1. 7 mg/dL
2. D2. 14 mg/dL
3. D3. 28 mg/dL
4. D4. 56 mg/dL
3. Rellenamos los tubos rotulados previamente con los siguientes datos expresados en mL:
   
4. Agitamos los tubos por inversión, transferimos su contenido a las cubetas de espectrofotometría, seleccionamos la longitud de onda necesaria (660 nm) y comenzamos a medir.
   
   

RESULTADOS

• Resultados obtenidos en el espectrofotómetro:
• P1: 0,328 A
• P2: 0,64 A
• P3: 1,01 A
• P4:  1,601 A
• PB: 0,587 A
• Trasladando a la curva el valor de absorbancia obtenido en el tubo PB, obtenemos que su concentración de proteínas es de 15 mg/dL.