Práctica 6. Glucosa-HK 23/10/2019

OBJETIVOS

• El objetivo de esta práctica es determinar cuantitativamente el nivel de glucosa en suero o plasma.
  

UTILIDAD CLÍNICA

• La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del organismo; la insulina falicita la entrada de glucosa en las células.
• La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con una hiperglucemia, causada por un déficit de insulina.
• El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

FUNDAMENTOS

• La hexokinasa (HK) cataliza la forforilación de la glucosa por ATP a glucosa-6-fosfato (G6F). La glucosa-6-fosfato originada es reducida a 6-fosfogluconato en presencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa con reducción paralela de NAD a NADH.
• El aumento en la concentración de NADH en el medio es proporcional a la concentración de glucosa presente en la muestra ensayada.

APARATOS

Espectrofotómetro, es muy importante encenderlo unos 15 minutos antes de comenzar a utilizarlo

MATERIALES

Pipeta automática y puntas desechables

Gradilla con tubos de ensayo y tapones

Soporte para cubetas y cubetas de espectrofotometría de vol: 1 cm

REACTIVOS

Tampón para preparar el RT

Enzimas para preparar el RT

Calibrador

MUESTRA

Suero

PROCEDIMIENTO

• Preparamos blanco, patrón y muestra

1. Preparamos en tubos: blanco, patrón y muestra siguiendo las indicaciones:
   

• Técnica

1. Debemos mezclar e incubar los tubos preparados en el paso anterior 5 minutos a 37ºC.
   
2. Ajustamos el espectrofotómetro a cero utilizando el blanco.
3. Leemos la absorbancia del patrón y la muestra frente al blanco de reactivo. La absorbancia debe ser leída INMEDIATAMENTE, ya que el color no es estable.

   

   Patrón

   

   Muestra

RESULTADOS

• Resultados obtenidos:
• Patrón: 0,356 A
• Muestra: 0,797 A
• Aplicamos la fórmula:
  
• Obtenemos un resultado correcto: 223,8 mg/dL de glucosa en la muestra.