Práctica 8. Medición hemoglobina glicosilada total. HbA1c. 14/11/2019

OBJETIVOS

  • El objetivo de esta práctica es medir la hemoglobina glicosilada (HbA1c) en sangre humana utilizando el NycoCard READER II.

UTILIDAD CLÍNICA

  • El NycoCard HbA1c es un test de diagnóstico in vitro para medir de una forma rápida la hemoglobina glicosilada (HbA1c) en la sangre humana. Se recomienda medir el HbA1c a largo plazo en las personas con diabetes mellitus.

FUNDAMENTOS

  • Consiste en un test de afinidad del boronato. Los reativos que utilizamos en este test contienen sustancias que rompen los eritrocitos y producen una precipitación específica de la hemoglobina, luego un conjugado de ácido bórico acoplado a un colorante azul se fija a las configuraciones cis-diol de la hemoglobina glicosilada. 
  • Cuando la sangre es adicionada al reactivo, los eritrocitos son inmediatamente lisados y la hemoglobina total precipita. El conjugado de ácido bórico se une inmediatamente a la configuración cis-diol de la hemoglobina glicosilada.
  • Una alícuota de esta mezcla con el reactivo se aplica sobre la placa test, y la hemoglobina total libre o conjugada permanece en el filtro. El exceso de conjugado es eliminado por la solución de lavado. El precipitado es valorado por la medida de la intensidad de la coloración azul (hemoglobina glicosilada) o roja (hemoglobina total).

MATERIALES
TD/Dispositivo-test
Puntas para micropipetas
Micropipetas

REACTIVOS
R1/Reactivo
R2/Solución del lavado

MUESTRA
Sanngre con anticoagulante EDTA

APARATOS
NycoCard READER II

PROCEDIMIENTO

  • Preparamos la muestra.

  1. Una vez atemperados los reactivos, añadimos 5 μL de sangre completa en el tubo de ensayo prellenado con el R1/Reactivo.
  2. Mezclamos bien y dejamos reposar durante 2 minutos, pero sin superar los 3 minutos.

  • Aplicamos la muestra.

  1. Mezclamos nuevamente con el fin de obtener una suspensión homogénea.
  2. Depositamos 25 μL de la mezcla sobre el TD/Dispositivo-test manteniendo la micropipeta separada al menos 0,5 cm de la placa del test para evitar romperla. Esperamos un mínimo de 10 segundos.

  • Aplicamos R2/solución de lavado.

  1. Añadimos 25 μL de R2/Solución de lavado sobre la placa dispositivo, dejando penetrar la solución de lavado completamente sobre la membrana. Esperamos un mínimo de 10 segundos.

  • Lectura del resultado.

  1. Leemos el resultado dentro de los 5 minutos siguientes utilizando NycoCard READER II. 
    1. Debemos calibrar el aparato al blanco antes de comenzar a utilizarlo. Para ello se utiliza un dispositivo de calibración especial que se guarda bajo el capuchón.
    2. Debemos situar la boquilla del lápiz lector sobre el agujero del test y deslizar el manguito del lápiz lector hacia abajo para iniciar la medida.

RESULTADOS

  • Obtenemos un resultado de 3% de hemoglobina glicosilada (HbA1c). El resultado se encuentra dentro de los valores normales, ya que debería ser <5%.

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